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冷冻精子卵子,甚至人体是如何实现的?

本帖由 漂亮的石头2015-12-01 发布。版面名称:知乎日报

  1. 漂亮的石头

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    利用液氮冷冻精子卵子甚至人体是如何实现的?

    [​IMG] 死者代言人,我为死者代言

    细胞冻存时是逐步缓慢冷冻的,如果细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻,细胞内外的水分都会很快形成冰晶,冰晶的形成将引起非常多的不良影响。

    冰晶会造成细胞内空间结构的变化,蛋白质变性,还能直接破坏 DNA 的正常结构,直接导致细胞死亡。

    所以冻存细胞的时候需要采用甘油或者二甲基亚砜(DMSO)来作为保护剂,这两种物质能降低冰点,增加细胞膜的通透性,使细胞内的水分渗透到细胞外形成冰晶,减少岁细胞内的破坏。

    在实际操作的时候,要按照一定的时间、程序来逐步降低温度,并不是直接放到液氮中进行“速冻”……

    降温过快会影响水分渗出,过慢则促进冰晶的形成。

    以往传统有采用:

    将冻存的细胞置于 4℃ 2h,0℃ 4h,-20℃ 过夜,次日取出悬挂液氮罐口 30min 后,下降到液氮中保存。
    (龚守良.实用基础医学实验技术 [M]. 吉林: 吉林科学技术出版社, 1990.233-245.)​

    也有文献表示这样的方法并不好,而是采用:

    将所需冻存的细胞加入冻存液后直接置于 -70℃ 冰箱中过夜,第 2 天放入液氮中。
    (曾艳, 付浩, 韦星呈, 等. 肿瘤细胞冻存方法的探讨 [C]. 第五届沈阳科学学术年会. 2008:156-157.)​

    在细胞培养方面,司徒镇强在 1996 年出版的《细胞培养》一书中给出了 3 种不同的方法。

    1、标准的冻存程序为降温速率:1~2℃/ 分;当温度达到 -25℃ 以下时,可增至 5~10℃/ 分;到 -100℃ 时,可迅速放入液氮中。这里可以使用能精确控制温度的细胞冻存器。
    如果没有该设备,还给出了其他方法:
    2、将细胞放入 -70℃ 冰箱中,经过 3h 后取出,放入液氮内。
    3、或者将细胞从液氮容器口缓慢放入,按照 1℃/ 分的速度降温,在 30~40 分钟内到达液氮表面,保持 30 分钟后放入液氮。
    (司徒镇强. 细胞培养 [M]. 世界图书出版公司西安分公司, 1996.)​

    理论上按照程序进行冻存的细胞,在液氮充足,温度不发生巨大变化的条件下,是可以长年保存的。

    而在 -70℃ 冰箱中,尽管温度也很低,但是保存的时间要显著低于液氮。

    所以回到题主的问题,实验室进行细胞保存是需要加入保护剂,以及按照一定的规范流程进行操作的,并不是直接扔到液氮中,更不是放到普通冰箱里。

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